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產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
果膠甲酯酶(PE)試劑盒說明書 | 滴定法 | 48樣 | AS243 |
試劑組成和配制
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體×5 瓶，-20℃避光保存。臨用前根據(jù)用量每瓶加入4.5mL試劑二充分混勻。(3天使用完)
樣品處理
1. 組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g離心30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
2. 細胞：按照細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后于4℃，10000g 離心5min，取全部上清于4℃、100000g 離心30min，棄上清，取沉淀溶于1mL試劑一。
3. 血清：直接測定。
優(yōu)點如下：
1、快速簡便：操作時間短，48-50T，可測40例樣本左右，96-100T,可測80例樣本左右；
2、取樣量微：常規(guī)操作取樣量50l， 酶標儀操作僅需5l即可檢測，部分試劑盒取樣多少請；
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放3個月有效；
4、再現(xiàn)性好：20倍稀釋線性仍然良好；
5、回收試驗： X =99%；
6、受外界影響因素小：干擾因素少，重復性強；
7、測試面廣：可測動物血清(漿)、組織、各種體液、灌流液、各種培養(yǎng)細胞以及細胞培養(yǎng)上清液等，部分試劑盒適用于檢測植物。
測定步驟：
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規(guī)定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā)，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
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